服務(wù)簡(jiǎn)介
       WB（Western blot），即蛋白印跡或免疫印跡（immunoblotting），是一項(xiàng)在分子生物學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)等領(lǐng)域中應(yīng)用非常廣泛的技術(shù)。這一技術(shù)利用抗體與組織或細(xì)胞樣品中特定蛋白的特異性結(jié)合作用，根據(jù)顯色條帶的位置和強(qiáng)弱實(shí)現(xiàn)蛋白鑒定和表達(dá)分析。

WB技術(shù)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性。選用合適的內(nèi)參抗體能夠校正蛋白定量和上樣過程中的誤差，通過灰度計(jì)量可以定性或定量分析不同樣品中蛋白表達(dá)情況。Western blot常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。

用戶提供:

需檢測(cè)的樣品，一抗（也可以選擇由我公司提供），內(nèi)參抗體由我公司提供。

送樣要求：

離體后迅速超低溫處理并-80 ℃凍存的組織樣品，干冰運(yùn)輸；

組織：動(dòng)物組織應(yīng)不少于100 mg(綠豆大小以上)，植物組織不少于500 mg；

細(xì)胞：大于5x106個(gè)細(xì)胞；

細(xì)胞或組織裂解液總蛋白濃度須大于1 mg/mL，單個(gè)樣品不少于50 μL。 

實(shí)驗(yàn)步驟:

1、蛋白質(zhì)抽提 
  A、實(shí)驗(yàn)對(duì)象為組織樣品，取適量（250-500mg）新鮮組織樣品，加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑），勻漿后抽提總蛋白。 
  B、實(shí)驗(yàn)對(duì)象為細(xì)胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細(xì)胞，PBS清洗細(xì)胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白。 
  2、蛋白質(zhì)定量
  按BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作，測(cè)定樣品濃度。 
  3、變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE) 
  將準(zhǔn)備好的樣品液和生物素標(biāo)記的蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)分別上樣，標(biāo)準(zhǔn)加進(jìn)第一個(gè)孔中，電泳分離蛋白。 
  4、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或PVDF膜 
  5、膜的封閉和抗體孵育 
  A、膜在5％BSA溶液中室溫孵育1小時(shí)以封閉膜上的非特異結(jié)合。
  B、封閉過的膜加入一級(jí)抗體室溫孵育1.5小時(shí)，抗原抗體結(jié)合。
  C、加入HRP標(biāo)記的二級(jí)抗體以結(jié)合一級(jí)抗體及HRP標(biāo)記的抗生物素抗體以結(jié)合分子量標(biāo)準(zhǔn)，室溫孵育膜1小時(shí)。加入HRP標(biāo)記的GAPDH抗體可同時(shí)檢測(cè)GAPDH含量。
  6、結(jié)果檢測(cè)
   化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，膜與化學(xué)發(fā)光底物孵育，經(jīng)X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件，并用ImageJ分析軟件將圖片上每個(gè)特異條帶灰度值的數(shù)字化。
  7、數(shù)據(jù)分析 
   目的蛋白的灰度值除以內(nèi)參GAPDF的灰度值以校正誤差，所得結(jié)果代表某樣品的目的蛋白相對(duì)含量。 
  8、提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告
  包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

如何下單:

1. 郵件咨詢下單：填寫實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的信息后，發(fā)送至郵箱[email protected]。

2. 在線咨詢下單：點(diǎn)擊屏幕右側(cè)“在線咨詢”，或掃描二維碼添加微信，或撥打咨詢電話15810756989，我們會(huì)盡快安排工作人員與您聯(lián)系！