服務(wù)簡(jiǎn)介:
免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique )又稱(chēng)熒光抗體技術(shù),是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。很早以來(lái)就有研究者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性,所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時(shí),只要知道其中的一個(gè)因素,就可以查出另一個(gè)因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體(或抗原)上,與其相應(yīng)的抗原(或抗體)結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
該技術(shù)的主要特點(diǎn)是:特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快。主要缺點(diǎn)是:非特異性染色問(wèn)題尚未完全解決,結(jié)果判定的客觀(guān)性不足,技術(shù)程序也還比較復(fù)雜。
內(nèi)容步驟:
細(xì)胞爬片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
第一天:
1. 在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;
2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min;
3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室溫通透20min(細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟);
4. PBS浸洗玻片3次,每次3 min,吸水紙吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室溫封閉30min;
5. 吸水紙吸掉封閉液,不洗,每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒,4℃孵育過(guò)夜;
第二天:
6. 加熒光二抗: PBST 浸洗爬片3次,每次3min,吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗,濕盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min;注意:從加熒光二抗起,后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行。
7. 復(fù)染核:滴加DAPI避光孵育5min,對(duì)標(biāo)本進(jìn)行染核,PBST 5minx4次洗去多余的DAPI;8. 用吸水紙吸干爬片上的液體,用含抗熒光淬滅劑的封片液封片,然后在熒光顯微鏡下觀(guān)察采集圖像。
注意事項(xiàng)
1.取細(xì)胞爬片時(shí),動(dòng)作應(yīng)輕柔,防止將細(xì)胞爬片夾碎,影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
2.種細(xì)胞過(guò)程中,要注意將細(xì)胞輕柔混勻,“八”字或者“十”字形搖晃,防止細(xì)胞局部生長(zhǎng)過(guò)密。
服務(wù)流程:
方案溝通 合同確認(rèn)
收到樣品
細(xì)胞培養(yǎng)或者建模
成果交付
如何下單:
1 . 郵件咨詢(xún)下單:填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的信息后,發(fā)送至郵箱[email protected]。
2 .在線(xiàn)咨詢(xún)下單:點(diǎn)擊屏幕右側(cè)“在線(xiàn)咨詢(xún)”,或掃描二維碼添加微信,或撥打咨詢(xún)電話(huà)15810756989,我們會(huì)盡快安排工作人員與您聯(lián)系!