服務(wù)簡介:
研究某個基因的功能最常用的手段是在宿主細胞中過量表達或者通過RNA干擾的方法knock-down該基因,常規(guī)手段有瞬時轉(zhuǎn)染和篩選穩(wěn)定細胞系。高質(zhì)量的穩(wěn)定細胞系在生物學(xué)研究中扮演著非常重要的角色,包括基因功能研究、重組抗體、藥物開發(fā)等。穩(wěn)轉(zhuǎn)株即穩(wěn)定表達細胞株,指的是基于某一細胞系構(gòu)建的持續(xù)過表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應(yīng)用的穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建方法,具有高效整合、目標細胞廣泛等特點。我司可為科研工作者提供OE質(zhì)粒構(gòu)建、OE慢病毒包裝、過表達效果驗證以及OE細胞系建立等服務(wù)。
篩選出該基因的過表達或者RNA干擾的穩(wěn)定細胞系會給您的實驗帶來極大的便利。有了穩(wěn)定細胞系,后期的Co-IP或者Pull-Down實驗會非常便利;穩(wěn)定表達重組熒光蛋白的細胞系可以讓您動態(tài)地觀察分子在細胞中的運動。構(gòu)建穩(wěn)定細胞系的基本原理是將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉(zhuǎn)染到宿主細胞并整合到宿主染色體中,用載體中所含的抗性標志進行篩選。最常用的真核表達載體的抗性篩選標志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418來代替新霉素進行選擇性篩選,篩選得到可穩(wěn)定表達目的蛋白,或者穩(wěn)定表達沉默特定基因的細胞株。
篩選穩(wěn)定細胞系的方法:
1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后,單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系
2、慢病毒感染篩選穩(wěn)定細胞系
慢病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效,是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。慢病毒幾乎可以感染所有種類的細胞,并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組,進行長時間的穩(wěn)定表達,因此,慢病毒常用于制備穩(wěn)定表達/沉默特定基因的單克隆細胞株circRNA /LncRNA過表達和干擾慢病毒。
服務(wù)流程:
方案溝通 合同確認
收到樣品
開始試驗并記錄
成果交付
如何下單:
1 . 郵件咨詢下單:填寫實驗項目的信息后,發(fā)送至郵箱[email protected]。
2 .在線咨詢下單:點擊屏幕右側(cè)“在線咨詢”,或掃描二維碼添加微信,或撥打咨詢電話15810756989,我們會盡快安排工作人員與您聯(lián)系!