服務(wù)簡(jiǎn)介：

單克隆篩選是新一代細(xì)胞克隆篩選和挑取技術(shù)，細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)能夠更少時(shí)間里，自動(dòng)化篩選并挑取更高水平表達(dá)的細(xì)胞克隆，擁有5組熒光通道，可以同時(shí)使用3組，細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)避免有限稀釋，快速高效篩選挑取雜交瘤克隆，建立穩(wěn)定細(xì)胞株，干細(xì)胞及特殊表面標(biāo)記細(xì)胞挑取及昆蟲細(xì)胞篩選挑取。 

單克隆篩選方法有有限稀釋法，半固體培養(yǎng)基挑選法，以及流式細(xì)胞術(shù)挑選法等。這其中有好多需要關(guān)注的點(diǎn)，例如挑選細(xì)胞的參數(shù)，挑選方法本身對(duì)細(xì)胞的損傷等。所以說，一個(gè)高效的篩選方法絕對(duì)能讓工作效率提高好幾倍。

有限稀釋法是目前常用的一種常規(guī)武器，這種方法篩選細(xì)胞的好處就是基本上不會(huì)傷害細(xì)胞。整個(gè)過程中細(xì)胞所經(jīng)歷的，也僅僅是在移液槍頭中的短暫停留，因此幾乎是零損傷。不過，這種方法的弊端也是顯而易見，就是效率問題。首先是鋪板效率，雖然不到一分鐘能將一塊96孔板鋪滿，但是一般來(lái)說96孔中有細(xì)胞的概率在2/3左右，其中單個(gè)細(xì)胞的概率就更小了，這些細(xì)胞要經(jīng)過一段時(shí)間的生長(zhǎng)，抗體分泌之后，在其上清液中去檢測(cè)抗體含量，流程耗時(shí)太長(zhǎng)，且效率低下，但是在沒有更先進(jìn)的設(shè)備的時(shí)候，這還是目前好的選擇。

流式細(xì)胞分選儀是挑選細(xì)胞的不二法寶，在細(xì)胞分析分選當(dāng)中占有重要一席。在很多抗體研發(fā)企業(yè)中，也都有用到流式細(xì)胞儀來(lái)挑選高產(chǎn)細(xì)胞株，在這一應(yīng)用領(lǐng)域有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，分選快速（每秒上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞）。

雜交瘤單克隆抗體制備技術(shù)的基本原理是利用聚乙二醇作為細(xì)胞融合劑，使免疫的小鼠脾細(xì)胞與具有不斷繁殖能力的小鼠骨髓瘤細(xì)胞在體外進(jìn)行融合，在HAT選擇性培養(yǎng)基的作用下，只讓融合成功的雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，經(jīng)過反復(fù)的免疫學(xué)檢測(cè)篩選和單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)(克隆化)，最終獲得既能產(chǎn)生所需單克隆抗體，又能不斷繁殖的雜交瘤細(xì)胞系，將這種細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，接種于小鼠腹腔，在其產(chǎn)生的腹水中即可得到高效價(jià)的單克隆抗體。由于單抗的應(yīng)用是從體外診斷向體內(nèi)腫瘤定位和治療方向發(fā)展，故鼠源性單抗出現(xiàn)了難以克服的缺點(diǎn)，特別是在體內(nèi)應(yīng)用時(shí)，存在主要組織相容性抗原(MHC)和超敏反應(yīng)問題。隨著鼠源單克隆抗體在臨床治療中越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，降低抗體免疫原性的要求也變得越來(lái)越迫切。為了克服這一問題科學(xué)家利用基因工程方法使小鼠的抗體人源化。通過構(gòu)建人一鼠嵌合抗體，在一定程度上減弱了人抗鼠抗體。

為了克服鼠源性單克隆抗體存在的問題，科學(xué)家利用基因工程方法使小鼠的抗體人源化。通過構(gòu)建人一鼠嵌合抗體，在一定程度上減弱了人抗鼠抗體。1984年Morrison等人成功地構(gòu)建了第一個(gè)人鼠單克隆抗體即嵌合抗體。嵌合抗體指的是鼠單克隆抗體的恒定區(qū)基因被人抗體的恒定區(qū)基因通過基因重組技術(shù)所替換而編碼并在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)而產(chǎn)生的單克隆抗體。

基本原理:抗體分子的特異性識(shí)別、抗原結(jié)合由輕鏈和重鏈可變區(qū)決定的，而異源蛋白產(chǎn)生的人抗鼠抗體反應(yīng)的主要是抗體恒定區(qū)。將小鼠單抗恒定區(qū)用人源化恒定區(qū)代替而拼接成嵌合抗體，使其重鏈和輕鏈的可變區(qū)來(lái)自小鼠，恒定區(qū)來(lái)自人類。簡(jiǎn)言之嵌合抗體既具有抗原結(jié)合特異性，又大大地降低了鼠單抗的異源性。嵌合抗體是基因工程抗體最早研究出來(lái)的一種抗體，在腫瘤治療和診斷方法已被廣泛的應(yīng)用。雖然嵌合抗體在一定程度上減弱了人抗鼠抗體反應(yīng)，但仍存在一少部分鼠源成分。這直接導(dǎo)致抗體被迅速清除，從而降低治療效果。 

小分子抗體

小分子抗體顧名思義是分子量較小的抗體片段，它的抗體分子的抗原結(jié)合部位僅僅局限于重鏈和輕鏈的可變區(qū)。雖然分子很小但它既保持了親本單抗的親和力具有親本單抗一樣的特異性。種類主要包括:抗原結(jié)合片(Fab)抗體、Fv抗體、單鏈抗體、單域抗體與最小識(shí)別單位。

1.Fab抗體

Fab抗體為僅含Fab分子，Fab段由完整的輕鏈(恒定區(qū)CL和可變區(qū)VLCL)和重鏈Fd段(第一恒定區(qū)CH1和可變區(qū)VH)通過一個(gè)二硫鍵連接形成異二聚體，整個(gè)分了大小約占總抗體的三分之一，僅含有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。將完整輕鏈和重鏈Fd的編碼基因進(jìn)行連接，可在大腸桿菌中表達(dá)，形成完整的二硫鍵和立體折疊，可以保存Fab斷的功能。常被用于實(shí)驗(yàn)室的研究工具。

2.Fv抗體

Fv抗體僅由輕鏈和重鏈的可變區(qū)組成通過非共價(jià)鍵連接，是抗體分了保留完整抗原結(jié)合部位的最小功能片段。該片段由于是通過非共價(jià)鍵連接的，所以穩(wěn)定性不好，十分容易解離。采用適當(dāng)?shù)姆椒▉?lái)解決Fv片段穩(wěn)定性問題。

3.單鏈抗體

單鏈抗體的問世解決了Fv抗體的穩(wěn)定性問題。它由適當(dāng)?shù)墓押似账嵝蛄袑⑤p鏈和重鏈可變區(qū)連接而成，形成單一鏈的分子，故稱為單鏈抗體。就是單一鏈的結(jié)構(gòu)大大增加了Fv片段的穩(wěn)定性。相對(duì)完全抗體而言，單鏈抗體在臨床上作為治療劑有好多優(yōu)越性。但它也有親和力下降等缺點(diǎn)。

4.單域抗體

單域抗體僅含重鏈可變區(qū)，結(jié)構(gòu)比Fv的亞單位還小，它是一個(gè)具有抗原結(jié)合活性的分子。同完整抗體相比，單域抗體仍然具有與抗體結(jié)合的同等能力及穩(wěn)定性。

5.最小識(shí)別單位

比單域抗體還小的最小識(shí)別單位僅含可變區(qū)中單一CDR結(jié)構(gòu)，分子量十分小僅占完全抗體的1%左右，親和力也相當(dāng)?shù)?，所以被命名為最小識(shí)別單位。雖然最小識(shí)別單位分子量小、親和力低，但是它具有與抗原結(jié)合的能力。

人源性抗體

從最初的鼠源單抗技術(shù)到人源化技術(shù)，單克隆抗體在幾十年的歲月中取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展。人源化的問世使單克隆抗體基本解決了人抗鼠源性問題。但有用人源化的抗體基因均來(lái)自雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤的這個(gè)操作過程很復(fù)雜且耗時(shí)加之利用雜交瘤技術(shù)難以制備自身抗原抗體和全人源抗體，這兩大缺點(diǎn)成為基因工程抗體應(yīng)用的絆腳石。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步單克隆抗體進(jìn)入了一個(gè)嶄新的發(fā)展階段一一人源性單克隆抗體。它主要包括噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)、轉(zhuǎn)基因小鼠制備人源性抗體、核糖體展示技術(shù)三部分。 

內(nèi)容介紹： 

小鼠單克隆抗體，基于單B細(xì)胞的抗體發(fā)現(xiàn)，是最新的單抗發(fā)現(xiàn)技術(shù)。小鼠單克隆細(xì)胞株，這種技術(shù)結(jié)合了單細(xì)胞分離鑒定技術(shù)和高通量測(cè)序技術(shù)，以單個(gè)B細(xì)胞為起始點(diǎn)，快速獲得抗原特異性抗體。B細(xì)胞抗體開發(fā)技術(shù)適用于多個(gè)動(dòng)物物種，抗體發(fā)現(xiàn)效率高、處理通量高。獲得的抗體經(jīng)體內(nèi)天然成熟，具有豐富的基因多樣性，可以為抗體藥開發(fā)，提供更多的候選抗體分子。

兔子單克隆抗體，兔B細(xì)胞獨(dú)特的個(gè)體發(fā)育機(jī)制，造就了高親和力、高特異性且穩(wěn)定的兔單克隆抗體（mAb）。兔mAb皮摩爾級(jí)的親和力水平為臨床診斷及治療提供了更高的靈敏度，降低抗體用量的同時(shí)，也降低了藥物副作用。此外，對(duì)小分子物質(zhì)和精細(xì)表位的出色識(shí)別能力，也讓兔單抗在免疫診斷試劑和抗體藥開發(fā)中越來(lái)越受歡迎，特別是在免疫組織化學(xué)、腫瘤檢測(cè)及靶向治療方面。

兔單抗優(yōu)勢(shì)

結(jié)構(gòu)穩(wěn)定：90-95%的輕鏈為κ1，κ1的鏈內(nèi)二硫鍵讓輕鏈結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定。

親和力高：抗體KD值達(dá)10-12M，親和力是常規(guī)抗體的100-1000倍。

識(shí)別精準(zhǔn)：識(shí)別小分子（< 600 kDa）、PTM、單氨基酸取代等細(xì)微的表位變化。

多樣性豐富：非近交品系繁殖，親和力成熟時(shí)間長(zhǎng)，SGC、SHM多樣性機(jī)制相結(jié)合。

免疫應(yīng)答強(qiáng)：對(duì)小分子抗原、半抗原可產(chǎn)生強(qiáng)烈免疫反應(yīng)。

兔IgG沒有亞類，N末端和D-E環(huán)中具有較少的氨基酸，易于分子克隆和工程設(shè)計(jì)，更適于抗體藥物開發(fā)。兔抗90-95%的輕鏈為κ1，其VL和CL之間存在鏈內(nèi)二硫鍵，輕鏈結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定。兔單抗能夠識(shí)別小分子及翻譯后修飾、單個(gè)氨基酸取代等細(xì)微的表位變化，表位識(shí)別特異性更高。

服務(wù)流程：

方案溝通  合同確認(rèn)  收到樣品   進(jìn)行實(shí)驗(yàn)并反饋  抗體或細(xì)胞株交付

如何下單：

1 . 郵件咨詢下單：填寫實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的信息后，發(fā)送至郵箱[email protected]。

2 .在線咨詢下單：點(diǎn)擊屏幕右側(cè)“在線咨詢”，或掃描二維碼添加微信，或撥打咨詢電話15810756989，我們會(huì)盡快安排工作人員與您聯(lián)系！