項(xiàng)目簡介

實(shí)時熒光定量PCR 技術(shù)（Real-Time Quantitative PCR）是通過對PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時檢測從而實(shí)現(xiàn)對起始模板定量及定性分析。在實(shí)時熒光定量PCR 反應(yīng)中，引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì)，隨著PCR 反應(yīng)的進(jìn)行，PCR 反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強(qiáng)度信號，從而通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化。本公司主要提供目前使用較多的SYBR Green I 熒光染料法和Taqman 探針法。

相關(guān)技術(shù)的概念

基線（Baseline）

在PCR 擴(kuò)增反應(yīng)的最初幾個循環(huán)里，熒光信號變化不大，接近一條直線，即是基線。一般來講，第3-15 個循環(huán)的熒光值就是基線。

熒光閾值（Threshold）

閾值一般是基線的熒光信號標(biāo)準(zhǔn)差的10 倍，熒光閾值設(shè)定在PCR 擴(kuò)增的指數(shù)期。

CT 值（Ct value）

Ct 值表示的是每個PCR 反應(yīng)管內(nèi)熒光信號到達(dá)設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。

相同模板在同一臺PCR 儀上相同條件下重復(fù)96 次擴(kuò)增的擴(kuò)增曲線圖可以看出終點(diǎn)處檢測產(chǎn)物量不恒定，但是Ct 值則極具重現(xiàn)性。

研究表明，各模板的Ct 值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct 值就越小，反之亦然。利用已知起始拷貝數(shù)（絕對量）的的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)（絕對量）的對數(shù)，縱坐標(biāo)代表Ct 值。因此，只要獲得未知樣品Ct 值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)（絕對量）。 

1. 技術(shù)流程

2. 結(jié)果展示

擴(kuò)增曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線的擴(kuò)增曲線

溶解曲線（SYBR Green I 法）

標(biāo)準(zhǔn)曲線（絕對定量）

3. 可提供的服務(wù)

(1) 核酸提取（包括基因組DNA、RNA、cDNA反轉(zhuǎn)錄）

(2) 引物設(shè)計(jì)及合成

(3) 制備標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒

(4) 標(biāo)準(zhǔn)曲線

(5) qPCR擴(kuò)增及熒光信號采集

4. 送樣要求

Total RNA/gDNA：50 ng/ul 以上，至少20ul，條帶無降解。需低溫運(yùn)輸

細(xì)胞： 10?以上，需收集細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸

細(xì)菌/酵母菌：10?以上，需收集菌體，完全去除培養(yǎng)液，立即放入液氮中，放-80℃冰箱凍存，干冰運(yùn)輸

組織：300mg以上，需干冰運(yùn)輸

血液：>1ml，需干冰運(yùn)輸

葉片或其他材料：>100mg，需干冰運(yùn)輸

5. 公司提供的結(jié)果

(1) 原始數(shù)據(jù)（excel表）

(2) 實(shí)驗(yàn)報(bào)告（包括擴(kuò)增曲線、融解曲線（SYBR Green I 法）、原始數(shù)據(jù)、標(biāo)準(zhǔn)曲線（絕對定量）、相對定量結(jié)果的柱狀圖等相關(guān)信息）

如何下單

1. 郵件咨詢下單：填寫實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的信息后，發(fā)送至郵箱[email protected]。

2. 在線咨詢下單：點(diǎn)擊屏幕右側(cè)“在線咨詢”，或掃描二維碼添加微信，或撥打咨詢電話15810756989，我們會盡快安排工作人員與您聯(lián)系！