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真核表達(dá)系統(tǒng)

服務(wù)簡介:

雖然原核表達(dá)有它的優(yōu)勢,但是近年來利用真核表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)目的蛋白越來越受到重視。目前,基因工程研究中常用的真核表達(dá)系統(tǒng)有酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。真核表達(dá)它補(bǔ)充了一些原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)中所缺乏的功能,例如真核表達(dá)時(shí)能夠形成穩(wěn)定的二硫鍵,在蛋白經(jīng)過翻譯后可對蛋白進(jìn)行正確修飾,使表達(dá)出來的蛋白更具天然活性而不是被降解或者是形成包涵體;利用真核表達(dá)系統(tǒng)可以誘導(dǎo)高效表達(dá),加快了人們對基因研究以及藥物研究的進(jìn)程。

將原核基因調(diào)控系統(tǒng)引入真核基因調(diào)控領(lǐng)域,其優(yōu)點(diǎn)是:

①根據(jù)原核生物蛋白與靶DNA間作用的高度特異性設(shè)計(jì),而靶DNA與真核基因調(diào)控序列基本無同源性,故不存在基因的非特異性激活或抑制;

②能誘導(dǎo)基因高效表達(dá),可達(dá)105倍,為其他系統(tǒng)所不及;

③能嚴(yán)格調(diào)控基因表達(dá),即不僅可控制基因表達(dá)的“開關(guān)”,還可人為地調(diào)控基因表達(dá)量。

真核表達(dá)系統(tǒng)分類、優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用:

表達(dá)系統(tǒng)

類別

優(yōu)缺點(diǎn)

表達(dá)方式

優(yōu)缺點(diǎn)

系統(tǒng)應(yīng)用與比較

真核表達(dá)系統(tǒng)

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

能誘導(dǎo)高效表達(dá),對表達(dá)的蛋白進(jìn)行正確折疊,并進(jìn)行復(fù)雜糖基化修飾,蛋白活性接近于天然蛋白,不需去除內(nèi)毒素,周期較長,操作復(fù)雜,需要細(xì)胞房,無菌,成本投入高

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

能夠快速靈活的制備活性蛋白,周期為3-4天;外源基因不能整合到細(xì)胞上,不能穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白,不適合大批量表達(dá)蛋白。

細(xì)哺乳動(dòng)系統(tǒng)是基因工程藥物的生產(chǎn)平臺,適用于新基因的發(fā)現(xiàn),蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的研究。是真核表達(dá)系統(tǒng)中成本最昂貴的但是也是唯一可以表達(dá)復(fù)雜蛋白基因的系統(tǒng)。

穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建

外源基因能在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá),篩選出的穩(wěn)定細(xì)胞株能夠?qū)崿F(xiàn)蛋白的大量生產(chǎn)篩選困難且時(shí)間長,投入大

酵母表達(dá)系統(tǒng)

遺傳背景清楚,操作較為簡便,容易進(jìn)行遺傳操作,有較為完善的真核蛋白表達(dá)控制系統(tǒng);

畢赤酵母表達(dá)

能大規(guī)模真核表達(dá)蛋白,可表達(dá)出克級蛋白;甲醇誘導(dǎo)操作方面需要時(shí)間;甲醇毒性大,不適用于生產(chǎn)食品蛋白.

在基因,遺傳疾病研究中運(yùn)用廣泛,許多遺傳性疾病的基因都和酵母基因有很高的同源性,研究酵母基因的編碼以及其真核蛋白表達(dá)的蛋白可加深對這些疾病的了解,與哺乳動(dòng)物系統(tǒng)相比只能表達(dá)簡單修飾的蛋白。

釀酒酵母表達(dá)

機(jī)理清楚,遺傳操作簡單;沒有特異型病毒,成本低;可能會超糖基化;產(chǎn)生乙醇對細(xì)胞具有毒性。

昆蟲表達(dá)系統(tǒng)

細(xì)胞表達(dá)量高;表達(dá)的外源基因片段很大,最大可達(dá)到200KD;可實(shí)現(xiàn)蛋白的糖基化和磷酸化修飾;投入成本較高。

昆蟲系統(tǒng)適用于表達(dá)高等真核生物蛋白 可大規(guī)模懸浮培養(yǎng),基礎(chǔ)研究,醫(yī)藥衛(wèi)生以及農(nóng)業(yè)。成本較酵母系統(tǒng)較貴,但比哺乳系統(tǒng)便宜



服務(wù)流程:

方案溝通 圖片1.png 合同確認(rèn) 圖片1.png 質(zhì)粒構(gòu)建 圖片1.png 蛋白表達(dá) 圖片1.png 蛋白純化 圖片1.png 成果交付

如何下單:

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