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    技術(shù)服務(wù)

單克隆抗體制備

1.項目簡介:

單克隆抗體是由一個只識別一種表位的B細胞克隆產(chǎn)生的同源抗體,特異性強,效價高,交叉反應(yīng)少或無交叉反應(yīng),但其制備過程較為復(fù)雜。

單克隆抗體技術(shù)可針對生物大分子(主要是蛋白質(zhì))進行準確定性、定量、定位的手段,如今已經(jīng)應(yīng)用至生物研究的各個方面,例如通過細胞表面蛋白標記對細胞進行分類篩選分析的熒光細胞分選技術(shù)、展示細胞內(nèi)特定蛋白定位的高分辨率熒光顯微鏡、檢測蛋白質(zhì)混合物中特定蛋白表達量的蛋白印跡法,常用于血清中細胞因子表達量測定的酶聯(lián)免疫吸附測定等,這些技術(shù)都需要運用到高質(zhì)量的單克隆抗體制劑。

2.服務(wù)流程:

 圖片3.png

3.送樣須知:

需提供蛋白或由我司進行目的蛋白表達純化,多肽信息或由我司進行設(shè)計合成,小分子化合物等材料的詳細信息;需要單克隆抗體的濃度與總量;是否需要提供鑒定結(jié)果,如需鑒定請?zhí)峁┛贵w及其說明書。

4. 交付內(nèi)容:

單克隆抗體:提供詳細實驗報告,2-3株單克隆細胞株,陽性細胞培養(yǎng)上清,純化后抗體2-5mg,ELISA效價檢測結(jié)果和Western blot結(jié)果。

多克隆抗體:提供詳細實驗報告,抗血清40ml 以及ELISA效價檢測結(jié)果和Western blot結(jié)果。

5.項目周期:

多克隆抗體制備1個月左右;單克隆抗體3-6個月。

注意事項:

1、細胞融合的關(guān)鍵:

①技術(shù)上的失誤常常導(dǎo)致融合的失敗,例如淋巴細胞沒有免疫反應(yīng),融合劑的選用以及融合細胞的操作。

②融合試驗最大的失敗原因是污染,融合成功的關(guān)鍵是提供一個無菌無毒的操作環(huán)境。

圖片4.png

2、抗原的制備:

抗原,是指能夠刺激機體產(chǎn)生(特異性)免疫應(yīng)答,并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細胞在體外結(jié)合,發(fā)生免疫效應(yīng)(特異性反應(yīng))的物質(zhì)。

抗原的基本特性有兩種,一是誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力,也就是免疫原性,二是與免疫應(yīng)答的產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng),也就是抗原性。

很多物質(zhì)都可以成為抗原,抗原的具體分類可以參見抗原,在進行單克隆抗體制備過程中,很多物質(zhì)都可以成為抗原,在常規(guī)的科研實驗中,經(jīng)常選用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug重組蛋白、偶聯(lián)多肽、偶聯(lián)小分子等作為抗原。

3、陽性克隆細胞的篩選:

應(yīng)盡早進行。通常在融合后10天作第一次檢測,過早容易出現(xiàn)假陽性。檢測方法應(yīng)靈敏、準確、而且簡便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì),以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法最簡便,RIA法最準確。陽性克隆的篩選應(yīng)進行多次,均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。


如何下單:

1. 郵件咨詢下單:填寫實驗項目的信息后,發(fā)送至郵箱[email protected]。

2. 在線咨詢下單:點擊屏幕右側(cè)“在線咨詢”,或掃描二維碼添加微信,或撥打咨詢電話15810756989,我們會盡快安排工作人員與您聯(lián)系!